Как успешно клонировать растение?
Планирую начать клонировать монстеры ради интереса, имеется ламинарная камера с фильтрами hepo14, F9. Планирую купить автоклав для стерилизации, авто пипетку, GS среду, гормоны и по мелочи расходники.
Что может пойти не так?
Что нужно обязательно приобрести?
Из каких частей лучше клонировать монстеры и как их найти, нужен будет микроскоп?
(В плане если макушки нет, то почку видно, она хорошо набухает на стволе, но как её в стволе макушки искать не знаю)
Если у кого-то есть реальный опыт мне не трудно заплатить за советы.
Буду благодарен за литературу
вот пока мой план:
Среда и её стерилизация
MS-соли + витамины B5: 4,43 г/л порошка MS (включая витамины Gamborg B5)
Сахароза: 30 г/л
Геллан-гум: 2,5 г/л
pH: 5,6–5,8 (корректировать 1 N NaOH или HCl до автоклавирования)
Разлив: 40 мл среды в каждую баночку до автоклавирования
Автоклавирование: 121 °C, 1,2 кгс/см² (≈15 psi), 25 мин
(Альтернатива – скороварка при 121 °C, ≈1,1 атм, 20–30 мин)
Этап инициации
Отбор экспланта: пазушные или верхушечные почки длиной 10–20 мм
Промывка: проточная вода + капля Tween-20, 10 мин
Стерилизация:
– 70 % этанол, 30 с
– 2 % NaClO, 20 мин
– (удалить наружные чешуйки, повторить 2 % NaClO, 20 мин)
– промывка 3 × стерильной водой
Посадка: в стерильном боксе поместить эксплант на гель и слегка прижать
Герметизация: крышка + парафильм (сохранять газообмен)
Этап мультипликации
6-BAP: 7,5 мг/л (0,0075 г/л)
NAA: 0,5 мг/л (0,0005 г/л)
Среда: та же, что и для инициации
Условия: 25 °C, 16 ч свет/8 ч темнота, ≈50 µmol м⁻² с⁻¹
Субкультура: каждые 60 дн пересаживать молодые побеги на свежую среду
Этап укоренения
MS + 30 г/л сахарозы + 2,5 г/л геллан-гума + 0,5 мг/л NAA
pH: 5,6–5,8
Автоклав: 121 °C, 15 psi, 20 мин; 40 мл на баночку
Перенос укоренившихся побегов в банки с укореняющей средой под те же климатические условия
Респект !
Вышка есть ? Так на кой сюда ? Без мазы ! Сплошной юзлесс ..
Если в серьёз – в аспирантуру на соискание .. https://aspirantura.hse.ru/for_s На специфических языках мы тоже ругаться могём 😊😊 !)
Гид по клонированию монстеры in vitro
1. Что может пойти не так?
Контаминация (грибы, бактерии) – главная проблема. Даже в ламинаре возможны заражения из-за нестерильных инструментов или недостаточной обработки экспланта.
Окисление тканей (фенольный шок) – потемнение срезов из-за стресса. Помогает антиоксидантная промывка (аскорбиновая/лимонная кислота).
Некроз экспланта – если концентрация стерилизатора (NaClO) слишком высокая или время обработки превышено.
Отсутствие каллуса – слабый гормональный баланс или неподходящая среда.
2. Что обязательно приобрести?
Стерилизаторы:
70% этанол, 2% гипохлорит натрия (или 10% Domestos), перекись водорода.
Tween-20 для промывки (уменьшает поверхностное натяжение).
Гормоны:
6-BAP (цитокинин для пробуждения почек).
NAA (ауксин для корнеобразования, менее токсичен, чем IBA).
Антиоксиданты:
Аскорбиновая кислота (100 мг/л в промывочный раствор).
Инструменты:
Скальпели с одноразовыми лезвиями, пинцеты (стерилизовать в автоклаве или спиртом + обжиг).
Микроскоп не нужен – почки монстеры видны невооружённым глазом.
3. Выбор экспланта
Лучшие варианты:
Пазушные почки (из узлов стебля) – самый надежный источник.
Верхушечные меристемы (если макушка есть) – менее склонны к вирусным инфекциям.
Фрагменты стебля с узлом – даже без видимой почки, спящие меристемы могут активироваться.
Где искать почки:
У монстеры почки расположены в узлах (места крепления черешков листьев к стеблю).
Если стеблевой участок без листьев, ищите небольшие бугорки – это и есть спящие почки.
4. Оптимизация вашего протокола
Стерилизация экспланта:
Добавьте 1–2 капли Tween-20 в гипохлорит – улучшает проникновение.
После NaClO промойте в стерильной воде с антиоксидантом (аскорбиновая кислота 100 мг/л).
Среда:
Для монстеры можно снизить 6-BAP до 5 мг/л, чтобы избежать гипермультипликации (деформированные побеги).
Активированный уголь (0,5 г/л) – снижает окисление.
Климатические условия:
Свет: Фитолампы 4000–5000 K, 16/8 часов.
Температура: 24–26°C.
5. Литература
"Plant Tissue Culture: Techniques and Experiments" (Roberta H. Smith) – базовый учебник.
"Micropropagation of Monstera deliciosa" (научные статьи в PubMed/Sci-Hub).
6. Альтернативные методы
Если in vitro кажется сложным, попробуйте воздушные отводки:
Надрежьте стебель, обработайте корневином, оберните мхом-сфагнумом и пленкой. Через 4–6 недель появятся корни.
точно расскажут на лекциях в ботанической кафедре:)
1. Что может пойти не так?
Заражение (грибок, бактерии) – если плохо простерилизовал среду или растение.
Почка не прорастает – выбрал мёртвую или слабую.
Гормоны не работают – просроченные или неправильная дозировка.
Среда не застывает – мало геллана или неправильный pH.
2. Что купить обязательно?
Автоклав (или хорошую скороварку).
Острые лезвия/скальпели (стерильные).
Пинцеты, спирт, хлорку (для дезинфекции).
pH-метр (чтобы среда была 5,6–5,8).
Гормоны (6-BAP и NAA) – без них почки не проснутся.
3. Откуда брать почки?
Лучше всего – макушка (верхушка стебля с узлом).
Если нет макушки – пазушные почки (бугорки на стволе под листьями).
Как найти? На монстере почки скрыты под сухими чешуйками. Нащупай бугорок – это и есть почка.
Микроскоп не нужен– всё видно глазом.
4. Твой план – норм, но можно проще:
Стерилизация: 70% спирт (30 сек) → 2% хлорка (15 мин) → промыть водой.
Среда:** MS + сахар (30 г/л) + геллан (2,5 г/л) + гормоны (6-BAP 7,5 мг/л + NAA 0,5 мг/л).
Свет:ь16 часов в день, температура ~25°C.
Пересадка: каждые 2 месяца на свежую среду.
Гугли протоколы по микроклонированию ароидных (Monstera, Philodendron).